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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

ELISA试剂盒测定中表达产物的检测

点击次数:485 发布时间:2016-12-06

ELISA试剂盒表达产物分真核表达产物和原核表达产物,下面看看ELISA试剂盒是如何检测这两种表达产物的吧!
(一)原核(大肠杆菌表达系统)表达产物
1、表达上清(非融合性蛋白)
直接将培养物和上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理;
2、菌体裂解物(融合性蛋白)
直接将培养物和上清吸出,10000rmp x10min,弃上清,沉淀用洗一遍,500-800rmp x10min,弃上清,DDW重悬沉淀,冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作为标本进行ELISA试剂盒检测,如有需要可进行透析或纯化处理;
(二)ELISA试剂盒真核表达产物
1、 细胞上清(分泌性蛋白)
1.2、贴壁细胞或半贴壁,直接将细胞培养上清吸出,10000rmp x10min, 取上清,-20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理;
1.2、不贴壁细胞,将培养基和细胞转移至10ml离心管,500-800rmp x10min,吸取上清至另一10ml离心管中,10000rmp x10min, -20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理;
2、 细胞裂解物(非分泌性蛋白)
2.1、贴壁细胞或半贴壁,直接将细胞培养上清吸出,然后用001M (pH 7.4)将细胞吹下至10ml离心管,500-800rmp x10min,弃上清,沉淀转移至1.5ml离心管中, DDW重悬,置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解,10000rmp x10min,取上清,-20℃或4℃保存,作为标本进行检测,如有需要可进行透析或纯化处理;
2.2、ELISA试剂盒不贴壁细胞,将培养基和细胞转移至10ml离心管,500-800rmp x10min,弃上清,沉淀移至另一10ml离心管中,0.01M (pH 7.4)重悬,500-800rmp x10min,弃上清,沉淀移至1.5ml离心管中, DDW重悬,置冰水浴中用超声波裂解仪进行裂解,10000rmp x10min,取上清, -20℃或4℃保存,作为标本进行ELISA试剂盒检测,如有需要可进行透析或纯化处理

 
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