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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

实验进程留心,elisa检测系统更安稳

点击次数:353 发布时间:2017-10-27

ELISA检测系统可以说是现在运用zui多的检测办法,并且技术手段许多,关于花板,假阳性,全显色,悉数显色,显色比空缺还低,这些都起到了至关重要的效果,必定要多留心,那么elisa检测系统安稳,这些实验进程都要留心。 

 

包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其辨认,所以保存抗原很重要,我做重组蛋白时,师兄都严厉正告我必定要在冰浴下缓慢消融就是这个道理。封suo就是让很多不相关的蛋白质充填这些旷地闲暇,然后排挤ELISA后的过程中搅扰物质的再吸附。但有时由于实验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。

 

常用封suo剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度运用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(首要为了扫除类似蛋白搅扰)和酪蛋白等等。具体的实验还要有巩固的理论外也要实践,看一下*可不可以应用到自己实验当中去。但*选用什么,要根据实验具体来实践。

 

应留心以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是经过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体外表的疏水基团间的效果,这种物理吸附长短特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质一般含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体外表。小分子必需依靠和大的蛋白载体偶联后才干固定在固相载体上。

 

还有有的包被原可能不是蛋白,关于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事前对其改造再加以包被,亲和素生物素:先亲和素先包被载体,参加生物素化的DNA,这种包被办法均匀、结实,已扩展应用于各种抗原物质的定量测定。常用的包被液除了刚才说到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

 

 
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