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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

操作因素对ELISA试剂盒的影响

点击次数:354 发布时间:2018-08-20

操作要素对ELISA试剂盒的影响ELISA试剂盒测定过程:固相包被→加待测样品→温育→洗刷+加酶标物→温育→洗刷→加底物→温育一加停止液→比色→断定成果。
ELISA试剂盒操作较冗杂,在操作中应留意以下5个方面。
1. 跟着病况的发展或由其他要素影响,某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇,因此有必要对标本进行预处理。直接法测定中,标本恰当稀释还可下降非特异性反响。
2. 加样一般运用加液器,在ELISA试剂盒中一般有4次加样:加标本、加酶结合物、加底物和加停止液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴,避免穿插污染。加酶结合物、底物和停止液时则不需更换吸嘴。
3. 在成批手艺检测中,还应留意操作时差的影响。加样及混匀时刻的差异,使抗原抗体反响和酶促反响时刻不一致,对竞争法及定量检测影响很大,不留意可能会导致过错成果或定量禁绝。
4. 洗刷是ELISA试剂盒操作过程中决议试验成败的一个关键过程。意图是除掉未结合的免疫反响物,停止抗原抗体反响,除掉标本中与反响无关的成分、游离的酶标物以及反响过程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手艺洗板,前者洗刷质量较好,各反响孔洗刷作用均一,批内、批间差异小,手艺洗板应留意操控各孔洗刷作用,差异不宜太大。
5. 断定成果须运用ELISA试剂盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,依据反响液色彩的不同选用不同波长的滤光片,以空白孔校零测定反响孔的吸光度值。酶标仪具有杰出的重复性。

 
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