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分享ELISA实验过程中各种样本不同的处理方法

点击次数:225 发布时间:2019-04-18

ELISA试验过程中各种样本不同的处理办法

在搜集样本前都必须有一个完好的方案,必须清楚要检测的成份是否满足稳定。对搜集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。关于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。标本应防止重复冻融。 液体类标本: 包含血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培育上清等。
1. 血清:室温血液天然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存     过程中如出现沉积,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求挑选EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟     左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如有沉积构成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管搜集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清,保存过程中如有沉积    构成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培育上清:检测分泌性的成份时,用无菌管搜集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心    搜集上清。
5. 培育细胞:检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左      右。通过重复冻融或参加安排蛋白萃取试剂,以使细胞损坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。保存过程中如有沉积构成,应再次离心。
6. 安排标本:切开标本后,称取分量。参加一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融    化后仍然保持2-8℃的温度。参加一定量的PBS(PH7.4),或安排蛋白萃取试剂,用手艺或匀浆器    将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。细心搜集上清。分装后一份待检测,其他冷     冻备用。
7. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行试验。若不能马上进
    行试验,可将标本放于-20℃保存,但应防止重复冻融.
8. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3按捺辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 
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