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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

仓鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒操作步骤

点击次数:223 发布时间:2019-07-18

仓鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒操作步骤

标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟. 
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

仓鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(INS)水平。用纯化的小鼠胰岛素(INS)捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔中依次加入小鼠胰岛素(INS),再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠胰岛素(INS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(INS)含量。

 
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