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ELISA试剂盒实验土壤/植物样本的采集及保存方法

点击次数:69 发布时间:2019-07-31

ELISA试剂盒实验土壤/植物样本的处理方法

植物标本的精采集及保存 
1、 称取0.1g(误差±3%以内)新鲜植物组织样本,在液氮中充分研磨;

2、 加入1ml的提取液(80%甲醇), 置于-20度过夜;

3、 于4度,8000rpm,离心1小时,取上清;

4、 上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是: 80%甲醇(1ml)平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇(5ml)洗柱→100%yimi(5ml)洗柱→100%甲醇(5ml)洗柱→循环。过柱后的样本真空干燥或氮气吹干,保存备用;

5、 上样前加入pH7.4 PBS缓冲液(1ml定容)。混匀后室温放置30分钟,然后4度离心(8000rpm,15分钟),取上清并暂时保存于4度待用。

6.植物标本中相关酶或蛋白的测定:(粗提取)

1、 新鲜植物组织请在液氮中充分研磨;

2、 加入样品体积9倍的提取液(pH 7.4 PBS缓冲液),3、 请于4度,8000rpm,离心30分钟,取上清并暂时保存于4度待用。

土壤:称取1g土壤,加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,用手工将标本充分混匀。2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清。分装一份待检测,其余冷冻备用,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。如果是测分泌蛋白,直接取上清检测,测试细胞内蛋白,要破碎细胞。

 
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