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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

ELISA试验中的温育有哪些考究?

点击次数:78 发布时间:2019-08-13

什么是温育?  
在ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反响,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反响的完结需求有必定的温度和时刻,这一保温进程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当。

 

温育时刻的考究:
ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发作。以抗体包被的夹心法为例,参加板孔中的标本,其间的抗原并不是都有平等的和固相抗结合的时机,只需zui靠近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐渐平衡的进程,因而需经扩散才干到达反响的结尾。在这以后参加的酶符号抗体与固相抗原的结合也相同如此。这就是为什么ELISA反响总是需求必定时刻的温育。

 

ELISA试剂盒温育温度的考究:
温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃(冰箱温度)等。37℃是试验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。在树立ELISA办法作反响动力学研讨时,试验标明,两次抗原抗体反响一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶峰。为加速反响,可进步反响的温度,有些试验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为完全,在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜,以构成zui多的沉积。但因所需时刻太长,在ELISA中一般不予选用。

 

温育保温的考究:
保温的方法除有的ELISA仪器附有特制的电热块外,一般均选用水浴,可将ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度敏捷平衡。为防止蒸腾,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此刻可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等,在盒底垫湿的纱布,zui终将ELISA板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度,特别是在气温较低的时分更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育,反响板均不宜叠放,以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反响,操作时的室温应严厉约束在规则的范围内,规范室温温度是指20-25℃,但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时,ELISA板只需平置于操作台上即可。应留意温育的

 

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