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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

ELISA中常见问题及解决方法经验总结

点击次数:245 发布时间:2019-11-20

【摘要】:ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。
相关专题 ELISA免疫实验技术 elisa 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下,以期给同行带来一些启发,提高试验质量。
下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因,并给出相应的解决办法
1. 选择试剂
选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2. 孵育
可能原因: ① 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底; ② 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。解决办法:① 贴封片或加盖; ② 按说明步骤严格控制操作时间。
3. 加样
可能原因: ① 血清或血浆标本分离不好即进行加样; ② 手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); ③ 加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法: ① 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。 ② 加样后及时放入孵箱。 ③ 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。④ 如果采用AT或其他全自动加样,选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 ⑤ 标本较多时,请分批操作。
4. 洗板
可能原因: ①采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 ② 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。 ③ 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法: ① 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干; ② 合理安排,或多用几台洗板机。
5. 显色
可能原因: ① 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂; ②加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法: ① 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; ② 加样时保持显色剂不外流; ③ A、B液应避免接触金属器械。
6. 终止
可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。
7. 读板
如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。
所以在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。
在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时作好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。现在国内已有相当数量的单位拥有全自动酶标仪,这对于实现ELISA标准化检测、提高检测质量起到了重要作用。

 
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