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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

上海纪宁解析:细胞冻存与复苏

点击次数:338 发布时间:2019-12-13

细胞冻存:
1. 试验前准备:细胞室及工作台紫外线照射15min;培育液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水浴箱37℃预热备用;搜集对数生长期细胞,在冻存前一天换液

2.适时去掉胰蛋白酶,参加少量新培育液。吸管吸取培育液吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的细胞悬液。

3.用吸管吸出培育瓶中的细胞培育液,PBS清洗2遍吸出冲洗液,参加适量胰蛋白酶消化。

4. 用吸管将培育液参加冻存管中,离心(1000r/min,10分钟)。

5. 去上清液,参加与细胞悬液等量的冻存液,用吸管悄悄吹打使细胞均匀

6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16~18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期贮存。-20℃不行超越1h,以避免胞内冰晶过大,形成细胞大量逝世,亦可越过此过程直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

7.记录每一个冷冻管的方位以保证在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

细胞复苏:
1、室内紫外消毒;培育基、PBS于37℃恒温水浴预热备用。

2、自液氮罐中取出冷冻管,当即放入37℃水槽中快速解冻,离心。

3、去上清,参加培育基,吹打,然后移入培育瓶中,用培育基清洗冻存管,清洗液也移入培育瓶中。

4、于培育瓶中参加适量培育基,放入CO2培育箱中培育

5、记录复苏日期;次日换液。

 
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