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上海纪宁实业有限公司 >>> 技术文献

Elisa试剂盒常用方法的优劣势对比

点击次数:380 发布时间:2020-06-16

我们知道,Elisa试剂盒可分为多种类型测定,是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或ji素的免疫分析技术。 我公司技术部将各种Elisa常用方法的优势劣势进行对比,结果如下:

一、直接法(direct Elisa)

将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。

1.优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。

2.劣势:试验中的一抗都得用酶标记,但不是每种抗体都适合做标记,费用相对提高。

二、间接法(indirect Elisa)

此测定方法与直接法类似,差别在于一级抗体没有酶标记,改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。

1.优势:二抗可以加强信号,而且有多种选择能做不同的测定分析。不加酶标记的一级抗体则能保留它zui多的免疫反应性。

2.劣势:交互反应发生的机率较高。

三、双抗体夹心法(sandwich Elisa)

被检测的抗原包被在两个抗体之间,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记,再透过酶标记的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取,才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。

1.优势:高灵敏、高专一性,抗原无须事先纯化。

2.劣势:抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。

四、竞争法(competitive Elisa)

 样本里的抗原(自由抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞争相同的抗体,当样品里的自由抗原越多,就可以结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然。经清洗步骤,洗去自由抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只有固定抗原的对照组结果相比较,根据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。

1.优势:可适用比较不纯的样本,而且数据再现性很高。

2.劣势:整体的敏感性和专一性都较差。

五、ELISA技术:基于细胞法(cell-based Elisa)

是一种新的定性蛋白检测技术,将细胞直接在微孔板里培养,待检测时,不需抽提蛋白和裂解细胞,便可直接测量微孔板里蛋白经刺激或抑制作用后的变化。

1.优势:无需裂解细胞,所以目标蛋白损失zui少,可测定完整细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。

2.劣势:不能测定抗原量。

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