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上海纪宁实业有限公司 >>> 新闻动态

小鼠ELISA试剂盒的不准确性

点击次数:621 发布时间:2016-01-18
 

    这就要求我们在实验过程做了总结,逐步完善,也就是学习,分享学习经验。以下总结实验和解决共同的问题,与你分享。小鼠ELISA试剂盒检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。

    然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与*次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,小鼠ELISA试剂盒加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测。同时也应避免细菌污染,因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
    血浆,用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本,标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,小鼠ELISA试剂盒避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。

 
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