网站首页
设为主页
加入收藏
网站首页 公司简介 新闻动态 产品展示 技术文献 客户留言 供求商机 联系我们
请输入产品关键字:  
食品农残检测
品牌对照品
试剂盒
elisa
标准品
ELISA试剂
sigma试剂
科研细胞
生化诊断试剂
公司名称:上海纪宁实业有限公司
地址:上海市金山工业区亭卫公路6558号9幢2447室
邮编:201507
电话:
手机: 021-66980655
联系人: 董经理
传真:021-66980655
网址:www.shjnkit.com
E-mail: 253437001@qq.com
上海纪宁实业有限公司 >>> 新闻动态

elisa试盒正确使用法

点击次数:454 发布时间:2017-09-04
 

标本的搜集和保存

用于ELISA试剂盒标本zui为常用的是血清(浆),有时由于特定的检测意图,也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。现在上运用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和医治药物等。对用于激素和医治药物测定的血清标本的搜集,要留意搜集时刻甚或体位有可能会对测定成果发生影响。如可的松在早晨4~6点之间,会有一峰值呈现:成长激素、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以阵发性办法释放,因而,在测定此类激素时,有必要在亲近相连的时刻距离内采纳数份血样本,以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时,血清中肾素活性将呈现明显增高。再如医治药物的检测,应根据药代动力学挑选服药后的zui适时刻抽血检测。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的搜集则没有时刻和体位方面的影响,只是在处理和保存方面要考虑以下几个方面:

(1)要留意防止呈现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因而,在以HRP为符号酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很简单在温育过程中吸附于固相,然后与后边参加的HRP底物反响显色。

(2)样本的收集及血清别离中要留意尽量防止细菌污染,一则细菌的成长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白发生分化效果;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶自身会对用相应酶作符号的测定办法发生非特异性搅扰。

(3)血清标本如是以无菌操作别离,则能够在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则主张冰冻保存。样本的长时刻保存,应在-70℃以下。

(4)冰冻保存的血清标本须留意防止因停电等形成的重复冻融。标本的重复冻融所发生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子发生损坏效果,然后引起假阴性成果。此外,冻融标本的混匀亦应留意,不要进行剧烈振动,重复颠倒混匀即可。

(5)标本在保存中如呈现细菌污染所形成的的混浊或絮状物时,应离心沉积后取上清检测。

 

试剂预备

在试验室,对试剂预备一般不太留意,一般的做法是,在试验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而疏忽了这种做法有可能影响后边温育时刻不够的问题,其直接的结果是对一些弱阳性标本的检测呈现假阴性。因而在ELISA测定中试剂的预备zui为要害的是,在试验开端前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20分钟以上后,再进行测定,以使试剂盒在运用前与室温平衡。这样做的意图,首要是为了在后边的温育反响过程中,能使反响微孔内的温度能较快地到达所要求的高度,以满意测定要求。其次,现在的产品ELISA试剂盒中的洗板液均需在试验室运用时对所提供的浓缩液稀释制造,因而稀释时所用的蒸馏水或去离子水应确保质量。此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反响显色前暂时制造。

 

加血清样本及反响试剂

在现在的ELISA试剂盒产品中,血清样本的参加几乎是仅有的要运用微量加样器参加样本的过程。运用微量加样器加样有必要留意的要害点是:加样不行太快,要防止加在孔壁上部,不行溅起和发生气泡。加样太快,无法确保微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅起会对附近孔发生污染。呈现气泡则反响液界面有差异。试剂的参加在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加,除了要留意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很简单呈现重复滴加或加在两孔之间的现象,这样就会在孔内的非包被区呈现非特异吸附,然后引起非特异显色。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的过错所形成的。

 

温育

温育是ELISA测定中影响测定胜败zui为要害的一个要素。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反响在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原彻底结合,有必要在必定的温度条件下反响必定的时刻。温育所需时刻与温度成反比,即温度越高,则所需时刻相对较短。zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。

温育这一步是临床ELISA测定中zui简单呈现问题的过程。一般现在国内ELISA产品试剂盒的反响温育时刻为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则一般为37℃ 1~2小时才干有较彻底的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因而,关于温育,在实践测定操作中必定要留意以下几点:

要确保在设定的温度下有满足的反响时刻。一般来说,加完样本和/或反响试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需求必定的时刻,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时刻可能还比较长,而在临床试验室中,很少有人留意这个问题,一般是将微孔板一放入温箱即开端计时,这样就很简单形成实践测定中温育时刻不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南边的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时刻,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由临床查验中心供给的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原由于何?这可能就与南边冬季室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时刻不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因而,为确保37℃下满足的温育时刻,临床试验室可自行确定本试验室不同时节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需求多长时刻孔内温度才干到达37℃,然后恰当延伸板条在温箱中的放置时刻。详细的做法是,用一小温度计放置板孔反响溶液中测量调查即可。

 

 

 
上一篇 : 如何选择ELISA    下一篇 :  科研采用哪家ELISA试剂盒,上海纪宁为你保驾护航
公司名称:上海纪宁实业有限公司 公司地址:上海市金山工业区亭卫公路6558号9幢2447室 邮政编码:201507 
联系人:董经理 联系电话:传真号码:021-66980655 公司网址:www.shjnkit.com
网站访问统计:590744 网站ICP备案号:沪ICP备13030217号-2 GoogleSiteMap 制作维护网站:智慧城市网 网后台登录地址
上海纪宁实业有限公司 专业生产、销售:ELISA试剂盒-ELISA检测-酶联免疫试剂盒 等产品
联系人
董经理
手机
021-66980655
点击这里给我发消息
 

智慧城市网

推荐收藏该企业网站