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上海纪宁实业有限公司 >>> 新闻动态

影响ELISA试剂盒操作的要素

点击次数:461 发布时间:2017-09-14
 

一、酶免ELISA试剂盒特异性要素


1、固相载体的挑选.ELISA中常用的固相载体有微量滴定板、小珠和小试管三种,以微量滴定板zui为常见.它具有超卓的吸附功用,孔底透明度高,空白值低,各板之间、同一板各孔之间功用附近.聚苯乙烯ELISA板因为资料的不一样和制作技能的不同,各产品的质量差异很大.因而,在挑选试剂盒一起要对其运用的微孔板类型进行认证,评估。


2、包被物的纯度.在酶联免疫测定特别是直接ELISA中,试剂的特异性取决于运用抗原的纯度.现在因为技能条件的捆绑,包被用抗原或抗体的纯度不或许抵达100%,所以有些非特异性显色不行避免,只能尽或许行进纯度,行进特异性.现在运用的包被抗原一般为组成多肽抗原. 


3、包被抗体的效价.具有高亲和力和高特异性的包被抗体,是抉择试剂特异性的首要方面。


4、关闭.是ELISA中首要的一步,意图是关闭固相载体表面尚未被所占有的空位,减少后续进程中非特异性蛋白的干扰。
 
二、ELISA试剂盒查验标本中含有酶符号物的干扰物

 

1、内源性干扰物:类风湿因子(RF)、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,大都为IgM类,能充当抗原成分与固相及酶标抗体反响,然后呈现非特异性显色。


2、外源性干扰物,常常因样品收集、储存、处理不妥构成如样品溶血,被细菌污染,标本凝聚不全等.溶血标本,红细胞溶解分裂,释放出血红素构成,而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物,以HRP为符号的ELISA测定中,溶血标本或许会增加非特异性显色.如有细菌污染,菌体中或许含有内源性HRP(辣根过氧化酶),有国内报导酶免HBsAg试剂检查溶血标本时可构成假阳性。

 
三、ELISA试剂盒操作进程中的疑问构成假阳性 


1、加样 :关于直接ELISA标本一般都要进行稀释,假定加样不准就会构成过失,特别当稀释倍数大时,很小的肯定过失,会致使较大的相对过失,使阴性(或弱阳性)标本呈阳性(或阴性).加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并留心不行溅起,不行发作气泡。


2、洗刷:在ELISA中准确的洗刷是确保得到可重复作用的关健一步,应引起操作者注重.无论是手工操作仍是机器操作,得出不准确的作用常与不准确的洗刷有关,ELISA就是靠洗刷来抵达分别游离和联络的酶符号物的意图.经过洗刷以消除残留在板孔中没能与固体抗原或抗体联络的物质,以及在反响进程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。


3 、温育 :每种试剂都有其反响方法,其间温度和温育时刻操控是首要要素.因孵育温度高,反响时刻长,会构成整板本底高,阳性率高.温育一般用湿盒或水浴,反响板不宜叠放,以确保各板温度都能灵敏平衡,为避免蒸腾,板上应加盖。


4、酶标仪判读 :作为记载测定作用的仪器,酶标仪的功用安稳与否,抉择作用的牢靠度.首要酶标仪应守时进行保护,对滤光片要守时校正;其次酶标仪波长设置要准确,运用双波长,一个检查波长,一个参比波长,以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异构成的光干扰.此外,在用酶标仪读数时先擦试微孔板底部并压平板条。


综上所述,因为酶联免疫吸附技能现在在技能上短少标准化,尽管现在上以及我国有了部分标准血清或参比血清(血清盘).但因为受方法学及技能条件的捆绑,在酶联吸附测定中有时不行避免的会呈现必定的非特异性,但我们能够经过以上措施把非特异性显色降至zui低限底,然后行进检查的特异性,并得到更准确、牢靠的实验作用。

 
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